在微量样本的核酸提取中,RNA的提取相较于DNA面临更多挑战。这是由于RNA更易降解,且有多种内源性和外源性RNase的存在,导致实验结果的可靠性和可重复性受到影响。为了解决这一重大难题,Z6·尊龙凯时推出的RNeasyMicro系列产品将显著提升微量RNA提取的效果。该系列采用QIAGEN经典的硅胶膜技术,配合专用的裂解和洗涤缓冲液,确保从微量样本中获得稳定的、高纯度的RNA,最低洗脱体积仅需10µl,可以获取更高浓度的RNA,满足下游对灵敏度要求较高的应用。
巴西的一组研究者通过对比多种RNA提取方法,验证了RNeasyMicroKit在微量样本中提取RNA的优越性。在研究中,研究人员使用酚-氯仿法、TRI保护液+Direct-zolRNAMiniPrepKit以及RNAprotect保护液+RNeasyMicroKit共计8种方法,从疟原虫样本中提取RNA,并对提取的RNA进行包括浓度和完整性在内的质控分析。随后,他们进行了qPCR和RNA-seq分析。在针对寄生虫密度较大的样本时,虽然TRIzol提取和RNeasyMicroKit获得的总RNA浓度最高,但qRT-PCR检测中,TRIzol方法的Cq信号较高,且RNA扩增效率低。相对而言,使用RNAprotect和RNeasyMicroKit提取的RNA在Cq值上表现更佳,同时其RNA的完整性更强,有效去除了基因组DNA,从而为下游实验结果提供了更准确和灵敏的支持。因此,研究人员最终选择RNeasyMicroKit进行RNA提取,为后续微量RNA测序实验打下了坚实基础。
RNeasyMicroKit适用于多种微量样本的RNA提取,如流式细胞术分选细胞、穿刺样本和激光显微切割样本等,之前我们已详细报道过。此外,该产品紧随研究热点,在多个新兴领域展现出优异性能。
对于长读长RNA-seq技术,该方法能够直接测序全长转录本,探测RNA表观修饰如甲基化,进而深入研究转录后水平调控基因表达的机制。然而,相比于NGS,长读长RNA-seq对RNA质量要求更高。在一项来自德国的研究中,研究人员首先使用RNeasyMiniKit提取大肠杆菌的RNA,随后经过聚腺苷酸化处理,再利用RNeasyMicroKit对微量RNA进行再次纯化,最终取得成功的长读长RNA测序结果。
近年来,类器官研究逐渐受到重视,研究人员借助3D培养技术从自体组织或干细胞生成类器官,并在各类疾病研究中发挥日益重要的作用。来自墨尔本的团队开发了一种从人诱导多能干细胞(iPSCs)生成3D类肾器官的阶梯式方法。考虑到不同细胞类型的存在,细胞比例的变化可能会影响疾病相关转录变化的发现,因此该研究团队对分化后类肾器官进行了全面的转录和形态学评估,通过RNA测序对57个完整的类器官及8323个单细胞进行了检测。他们在提取不同分化样本和多种大小的球状类器官时,如何保证RNA提取效果的稳定性成为一大挑战。然而,RNeasyMicroKit的使用有效解决了这一问题,确保了稳定的RNA产量与质量,为高质量的RNA测序奠定了基础。
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