中文

English

Z6·尊龙凯时细胞增殖检测试剂盒常见问题解答

发布时间:2025-03-11   信息来源:钟林芸

Z6·尊龙凯时的YF®488/555/594/647系列荧光探针具有不同的荧光基团,这导致在检测EdU时,所发射的荧光颜色存在差异。尽管这些探针在实验效果上相似,用户可根据个人偏好或需求自由选择。

Z6·尊龙凯时细胞增殖检测试剂盒常见问题解答

Z6·尊龙凯时的EdU试剂盒中,固定后使用3%BSAinPBS的目的是什么?在清洗步骤中,BSA能有效终止未反应的甲醛,确保实验的准确性。

关于在活细胞中进行Click-iTEdU检测的可行性,答案是否定的。虽然EdU可以在活细胞内进行代谢标记,但是所需的叠氮化物检测试剂和缓冲液成分均为细胞非透过型,因此Click反应必须在固定且通透的样品上进行。

质粒转染表达的荧光蛋白是否与Click反应兼容?检测顺序又是怎样的呢?由于本产品会对GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的发光产生影响,因此在染色后,GFP不能直接检测,建议使用GFP抗体进行间接检测。

如果观察到较高的本底干扰,这可能是由洗涤不充分导致的。叠氮化物和炔烃的Click反应具有高度选择性,因此生物体内几乎不可能发生副反应。为了降低本底干扰,增加BSA洗涤的次数是最佳方法。同时,可以设置一组无染料或无Click反应的对照,以排除自发荧光的干扰,并在无EdU体系中进行完整的Click反应,验证信号的特异性。

当标记样品信号非常低或没有信号时,可以采取以下措施提高信号:

  1. 确保试剂使用时呈无色状态,避免已变黄的添加剂或缓冲液。
  2. 确保细胞充分固定和通透,以便Click反应试剂能够进入细胞核。
  3. 避免在Click反应前在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂(如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等),以免影响铜离子的有效浓度。对于某些样本,可能需要额外的洗涤步骤。
  4. Click反应所需的铜离子为一价铜(Cu+),只有在适当的化合价下,Click反应才能有效。
  5. 延长Click反应时间至30分钟以上可能不会提高信号,建议使用新鲜的Click反应试剂再进行30分钟孵育,以提升标记效率。

对于细胞核的复染,可以使用Z6·尊龙凯时的试剂盒中提供的Hoechst33342进行染色,DAPI也是一个可选的染色剂。此外,EdU作为小分子化合物,能够有效穿透植物细胞的细胞壁,因此也可用于检测植物细胞核内的DNA复制。