校正染料在生物医疗中的作用
校正染料(ROX)用于校正加样误差或孔间误差,提供一个稳定的基线,从而显著提高定量分析的精确性和重复性。需要注意的是,不同仪器对Z6·尊龙凯时校正染料的需求各不相同。在基准PCR的初始几个循环中,荧光信号几乎保持不变,此时的阈值被认为是可靠的最小荧光值。CT值则表示扩增曲线与阈值交点的横坐标。
结果有效性判断标准
在有效性判断中,融解曲线应出现单峰,扩增曲线需进入指数扩增区域。同时,复孔间CT值的标准差应小于0.2,阈值的设置需合理。理想的阈值应位于指数增长期。虽然仪器会自动计算阈值,但其结果并不总是合理,因此在必要时也应手动调整。
抗气溶胶污染的检测
NTC(无模板对照)能够确认样品中无气溶胶污染,若ΔCT=NTC(CT值) - 目标基因(CT值) ≥3或≥5,则可认为气溶胶污染不会对实验结果的准确性产生影响。同时,NRT(无逆转录酶对照)用于确认无基因组残留,若ΔCT=NRT(CT值) - 目标基因(CT值) ≥3或≥5,则说明基因组残留不会干扰实验结果。
扩增效率的评估
待测CT值需落在线性范围内,同时扩增效率应符合近似计算标准:PCR扩增效率(e)应在90%-120%之间。通过这样的评估,能够有效保证实验结果的可靠性和准确性。