Z6·尊龙凯时的人小细胞肺癌细胞DMS114培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人小细胞肺癌细胞DMS114

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640+10%FBS+1%P/S

传代方法：建议初次传代比例为1:2，传代后每两天更换培养基。

备注：请采用无菌离心管收集培养基以作对比培养，如效果不理想，建议直接购买Z6·尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应将其培养至良好状态。假如细胞状态良好，请将完全培养液灌满培养瓶并封闭瓶口。清洁细胞瓶，使用75%酒精全面消毒，然后在超净工作台内进行无菌操作。将细胞瓶放置于37℃，5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定状态，再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片则默认收到状态良好。传代后，建议一瓶使用原有的完全培养基，另一瓶使用自主配置的完全培养基，以便进行对比培养，并在换液后将瓶盖稍微松动。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请将瓶中的完全培养液收集至离心管中，留出5ml培养基，放入37℃，5%CO2的孵箱中继续培养。如汇合度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，在37℃的培养箱中消化1-2分钟，随后用显微镜观察细胞消化情况。若细胞开始变圆并脱落，请迅速将培养瓶移回操作台，轻敲瓶子并加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例分瓶（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃，5%CO2的培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞，当细胞变圆后立即加入5ml完全培养基终止消化。轻轻吹打细胞使其脱落，悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后添加1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如果后续需要将细胞转至液氮罐中，请在-80℃冰箱存放至少24小时后再转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护装备），快速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，之后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，使用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶中，放于37℃，5%CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换新鲜的完全培养基，继续培养细胞。

四、注意事项

如果细胞在运输过程中发生细胞脱落现象是正常的，个别细胞可能不牢固。如果脱落较多，建议将所有培养液收集至离心管，按照上述方法处理收集的细胞。沉淀后加入胰酶1-2ml进行消化，重悬后再次分瓶传代并补充新的完全培养基。

五、售后条款

1) 可重发的情况

1. 由于运输导致的细胞丢失、瓶身破损、培养液泄漏等情况，可重发。
2. 细胞污染问题需在收到产品48小时内反馈真实实验结果，经核实后可重发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏24小时后大多数细胞未存活（需提供真实细胞状态照片），可重发。
4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内或常温发货细胞静置4小时后未开封出现污染，可重发。
5. 细胞活性问题需在收到产品7天内提出，并需通过台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发。
6. 细胞收到当天及第2、3天需拍照，3天内未告知的视为产品合格。若4-7天内出现问题，并提供前三天的照片及详细操作步骤并与技术人员沟通，经判断后可重发。

2) 不予重发的情况

1. 因客户操作不当导致的细胞污染，不予重发；
2. 用户不正确操作致使细胞状态不良，不予重发；
3. 使用非Z6·尊龙凯时推荐的细胞培养体系导致细胞状态不良，不予重发；
4. 细胞状态不佳且未提供细胞培养前三天照片，不予重发；
5. 在培养过程中进行其它处理，则不予重发；
6. 收到细胞后2天内未告知问题，则不予重发；
7. 根据具体情况另行判断。