Z6·尊龙凯时细胞培养条件概述：

培养条件：使用DMEM培养基，添加10% FBS和1% P/S，适合贴壁细胞。培养温度应维持在37℃。初次传代建议采用1:2的比例，传代时间间隔为两天。

细胞处理建议：收货后建议同时购买培养所需材料，可享受优惠。在收到细胞后，请首先处理，培养至良好状态后，装满完全培养液并密封瓶口，以确保细胞在运输过程中的安全。

细胞消毒步骤：收到细胞后，用75%酒精喷洒细胞瓶表面进行消毒，并在超净工作台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，使细胞状态稳定后再进行进一步处理。

细胞观察与拍照：通过显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（如40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片将作为重要的售后依据，若未提供照片，则默认细胞状态良好。

细胞传代步骤： a. 贴壁细胞传代： - 若细胞汇合度未超过80%，请将培养液收集至离心管中并保留5ml，然后放置于37℃、5% CO2培养箱中。 - 若细胞密度超过80%，即可进行传代。 - 操作步骤：1. 去除培养上清，使用无钙镁PBS冲洗1-2次；2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml于培养瓶中，置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞状态；3. 若细胞大部分变圆并开始脱落，立即在操作台轻敲培养瓶，加入5ml完全培养基以终止消化；4. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM下离心5分钟，弃去上清并重悬于1-2ml完全培养基中；5. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新鲜的完全培养基至5-8ml每瓶，并放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。

b. 悬浮细胞传代步骤： 1. 半换液法：在培养箱静置培养瓶约1小时后，轻轻吸走约3ml的培养基，添加3ml新鲜的完全培养基。如果培养基变色较慢，可以直接补充约500ul的FBS； 2. 离心换液法：如果需要分瓶，应将细胞悬液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养基重悬并按1:2的比例分至新的T25瓶中，添加6-8ml新配制的完全培养基，以维持细胞活力，后续传代可根据需要按1:2至1:5的比例进行。

细胞冻存步骤： 1. 当细胞覆盖培养瓶面积达80%时，弃去培养液，并用PBS洗涤一次； 2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml于培养瓶中，用显微镜观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基以终止消化，然后轻轻吹打细胞使其脱落；3. 将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM下离心5分钟； 4. 弃去上清，加入1mlZ6·尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中； 5. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，如后续需转移至液氮罐中，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐中。

细胞复苏步骤： 1. 戴上防护面具，从液氮中取出细胞冻存管，快速放入37℃水浴中解冻，直至管中无结晶；2. 用75%酒精擦拭冻存管外壁；3. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；4. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬后，接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2的培养箱培养；5. 第二天更换新鲜的完全培养基继续培养。

注意事项：在运输过程中，部分细胞可能会因不牢固而脱落。若脱落数量较多，可将培养瓶内的培养液收集至离心管中，进行1000RPM离心5分钟，利用上清作过渡培养，沉淀后加入1-2ml胰酶轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，重悬于1-2ml完全培养基后按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml每瓶，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。